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【實(shí)驗(yàn)方案】

一、研究對(duì)象：H9C2細(xì)胞株

二、研究藥物：1種測(cè)試藥

三、H9C2心肌細(xì)胞缺氧／復(fù)氧(hypoxia／reoxygenation，H/R)模型的構(gòu)建

遵守快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37℃，從液氮罐里拿出凍存管迅速投入37℃溫水中，并輕輕搖動(dòng)使其內(nèi)容物迅速融化（最好在1 min以內(nèi)），取出凍存管，微微上下晃動(dòng)凍存管，用75%酒精消毒后開啟，用吸管吸出溶解后的細(xì)胞懸液，注入離心管并加入5mL的含10%胎牛血清（FBS）的細(xì)胞培養(yǎng)液。以1000rpm離心5min，除去上清液，加入1 mL培養(yǎng)液吹打，使其形成懸浮液。用含20%FBS的細(xì)胞培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，接種到培養(yǎng)瓶，置于37℃、飽和濕度、5%CO2孵箱中培養(yǎng)，24h后更換一次培養(yǎng)液，隨后視細(xì)胞生長(zhǎng)情況及培養(yǎng)液顏色（一般待培養(yǎng)液變黃）更換培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。于 5% CO2加95 %N2孵箱中培養(yǎng)4h以模擬缺血環(huán)境，而后將細(xì)胞置于含 10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)24h，模擬再灌注環(huán)境。

四、藥物****對(duì)缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞模型的生物學(xué)功能的影響與機(jī)制研究

（一）CCK-8檢測(cè)藥物處理對(duì)心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧的影響

（二）QPCR檢測(cè)Y基因的表達(dá)水平。

（二）Western Blot檢測(cè)x蛋白的表達(dá)水平。

（四）流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡水平。

【結(jié)果展示】

1、CCK-8檢測(cè)藥物處理對(duì)心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧的影響

2、藥物****對(duì)缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞模型的生物學(xué)功能的影響與機(jī)制研究