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CRISPR/Cas9細(xì)胞敲除/入

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細(xì)胞系基因靶向操作服務(wù)

時(shí)間：2020-07-17 16:42:00 瀏覽：30421次

基因敲除敲入技術(shù)一直是研究特定基因功能的有效工具。威斯騰生物利用最新的CRISPR/Cas系統(tǒng)可以有效的實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞系特定基因的敲除和定點(diǎn)突變。

技術(shù)原理

Clustered Regularly Interspaced Short PalindromicRepeats（CRISPR）/Cas是細(xì)菌和古細(xì)菌不斷進(jìn)化而獲得的免疫防御機(jī)制，其中II型CRISPR/Cas免疫系統(tǒng)依賴Cas9內(nèi)切酶家族靶向和剪切外源DNA。CRISPR/Cas9系統(tǒng)通過(guò)小導(dǎo)向RNA(sgRNA)對(duì)切割區(qū)域進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而利用Cas9內(nèi)切酶實(shí)現(xiàn)靶向區(qū)域的切割以產(chǎn)生DNA雙鏈斷裂。該系統(tǒng)靈活簡(jiǎn)單，可實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶點(diǎn)的同時(shí)操作。目前我們采用Double Nicking技術(shù)，顯著降低脫靶率。

我們利用該技術(shù)，定點(diǎn)敲除和修飾各種細(xì)胞系中的特定基因。對(duì)打靶細(xì)胞進(jìn)行藥物篩選，利用CRISPR/Cas系統(tǒng)獲得的基因敲除細(xì)胞的剔除效率會(huì)明顯高于常規(guī)的利用RNAi和shRNA介導(dǎo)的基因敲落。

技術(shù)特色
1. 可實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶基因位點(diǎn)及多個(gè)基因的同時(shí)敲除
2. 最新Nickase酶/雙gRNA技術(shù)，顯著降低脫靶率
3. 無(wú)種屬限制，適用于各種細(xì)胞系的靶向敲除
4. 服務(wù)周期短，2個(gè)月即可交付陽(yáng)性細(xì)胞
服務(wù)內(nèi)容

靶向目標(biāo)序列g(shù)RNA的設(shè)計(jì)及載體構(gòu)建

目標(biāo)細(xì)胞系共轉(zhuǎn)染

陽(yáng)性細(xì)胞株的篩選和鑒定

應(yīng)用范疇

基因功能分析：在細(xì)胞水平研究基因的功能

定點(diǎn)突變：:建立點(diǎn)突變細(xì)胞，可用于藥物靶點(diǎn)研究。

啟動(dòng)子功能分析：該方法建立的啟動(dòng)子分析系統(tǒng)，可有效地分析內(nèi)源性啟動(dòng)子的強(qiáng)度，是一種最理想的分析系統(tǒng)。

服務(wù)流程

本平臺(tái)可制備的動(dòng)物模型（部分）

疾病	方法	動(dòng)物	模型成功率	操作難度	耗時(shí)程度
帕金森疾病	6-OHDA腦立體定位注射	Rat	70%~80%	簡(jiǎn)單	比較耗時(shí)
帕金森疾病	MPTP、IP或SC注射（急性or慢性）	Mouse	70%	簡(jiǎn)單	快速
抑郁癥	禁食、禁水、夾尾、冰水等慢性不可知刺激	Rat	80%	簡(jiǎn)單	非常耗時(shí)
抑郁癥	利血平藥物注射或者懸尾和強(qiáng)迫游泳	Mouse	60%	簡(jiǎn)單	非常耗時(shí)
脊髓損傷	脊髓半切、全斷、牽張、擠壓、打擊等	Rat	80%	普通	非常耗時(shí)
腦外損傷	顱腦損傷儀打擊致?lián)p	Rat	80%	普通	比較耗時(shí)
坐骨神經(jīng)損傷（周?chē)窠?jīng)損傷）	切斷或者夾閉神經(jīng)（手術(shù)）	Rat	90%	簡(jiǎn)單	一般
心肌缺血	心臟冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎	Rat	60%~70%	較難	非常耗時(shí)
心力衰竭	腹主動(dòng)脈縮窄手術(shù)致心力衰竭	Rat	90%	簡(jiǎn)單	快速
肺動(dòng)脈高壓	手術(shù)分流術(shù)和MCT IP或SC注射	Rat	80%	普通	一般
高血壓	單腎單夾腎血管或者兩腎一夾型腎血管	Rat	80%	簡(jiǎn)單	快速
粥樣動(dòng)脈硬化	高脂飲食+VD3喂養(yǎng)	Rat/Mouse	50%	簡(jiǎn)單	非常耗時(shí)
大腦中動(dòng)脈阻塞（MCAO）	線栓法制備	Rat	70%	普通	比較耗時(shí)
慢性支氣管炎	煙熏	Rat	80%	簡(jiǎn)單	耗時(shí)
過(guò)敏性哮喘	OVA+氫氧化鋁致敏	Rat/Mouse	80%	普通	耗時(shí)
肺炎模型	鮑曼不動(dòng)桿菌氣道滴注	Rat/Mouse	90%	簡(jiǎn)單	快速
肝炎—肝硬化—肝癌	DEN誘導(dǎo)	Rat	80%	簡(jiǎn)單	比較耗時(shí)
肝纖維化	CCL4誘導(dǎo)	Rat	80%	簡(jiǎn)單	耗時(shí)
膽結(jié)石模型	喂養(yǎng)致石飼料	Mouse	90%	簡(jiǎn)單	一般
急性胰腺炎	牛黃膽酸鈉胰膽管注射	Rat	90%	普通	快速
急性腎衰竭	順鉑尾靜脈注射/腎動(dòng)脈缺血	Rat	80%	普通	一般
體內(nèi)血栓	手術(shù)或者藥物誘導(dǎo)	Mouse	60-70%	普通	比較耗時(shí)
關(guān)節(jié)炎模型	Ⅱ型膠原+佐劑誘導(dǎo)	Rat/Mouse	90%	簡(jiǎn)單	一般
Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病	STZ或增加高脂飼料喂養(yǎng)藥物誘導(dǎo)	Rat/Mouse	80%	簡(jiǎn)單	比較耗時(shí)
荷瘤鼠/裸鼠成瘤	皮下成瘤	BALB/cA-nu mice	90%	簡(jiǎn)單	一般
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【本平臺(tái)合作項(xiàng)目】

分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、病理染色檢測(cè)、細(xì)胞敲除&敲入、模式與轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、SPF動(dòng)物保種、免疫學(xué)檢測(cè)、影像學(xué)檢測(cè)、原代培養(yǎng)、細(xì)胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測(cè)序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評(píng)價(jià)、藥理毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識(shí)產(chǎn)權(quán)服務(wù)！

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