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威斯騰生物經過10多年的發展，獲得了上百種細胞株和四十余種原代細胞培養經驗，并建立了龐大的細胞庫及原代培養資料庫。細胞平臺有資深實驗員、規范的SOP操作文件，萬級凈化細胞房，這些條件為保質保量完成每個客戶的實驗提供了保障。 同時，威斯騰生物結合多年原代及傳代細胞培養經驗，結合平臺已有的技術優勢，建立了完善的體外藥篩實驗，并引進RTCA(Real-time cellular Analysis，實時無標記細胞記錄儀），在藥篩過程中，全程實時記錄細胞真實狀況，為藥篩提供最真實精準的實驗數據。

大鼠骨髓間充質干細胞的分離

操作方法

（1）取SD大鼠（2周齡），頸椎脫臼法處死后立即用75%乙醇浸泡，移入超凈工作臺內，用大頭針固定大鼠四肢于工作臺面的泡沫板上。

（2）碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，無菌條件下用滅菌消毒后的鑷子和剪刀分離出大鼠股骨和脛骨，剔除骨頭表面肌肉，PBS溶液沖洗兩遍。

（3）從中間剪斷股骨和脛骨，用2ml無菌注射器吸取DMEM/F12溶液沖出骨髓細胞多次，再用針頭吹打，吸管吸入離心管內，1000r/min離心5min，棄上清，用PBS重懸細胞。

（4）緩慢將細胞懸液加入預先裝有5mL淋巴細胞分離液的15mL離心管內，保持細胞懸液在淋巴細胞分離液上層，注意不要攪動液面，保持二者分層界面。

（5）2000rpm離心15-25min，離心后溶液分4層，吸取中間骨髓基質細胞層（白色渾濁狀），PBS洗三次。

（6）用含15%胎牛血清及青鏈霉素的DMEM/F12以106/mL的細胞濃度接種于25cm2培養瓶中，置37℃、5%CO2恒溫培養箱中培養。

（7）24小時后棄去培養液（看細胞貼壁情況），PBS沖洗 2-3次去除未貼壁細胞，加入培養液繼續培養。以后每3d半量換液1次，一般10d細胞生長融合。

（8）經0.25%胰酶消化，1：2傳代，其后一般3-5d傳代1次，選取生長良好的第三代細胞進行后續實驗。

細胞形態

骨髓間充質細胞原代培養過程中，約24小時即可出現貼壁生長，細胞呈圓形、梭形、三角形生長緩慢。換液后細胞增殖明顯，出現以梭形為主的多種形態，10-14天70%-80%可融合達到傳代標準。傳代細胞形態單一，呈梭形或扁平型，增殖至細胞融合時呈漩渦狀和放射狀排列。

大鼠脂肪間充質干細胞的分離

操作步驟

1. 取大鼠，使用7%水合氯醛（0.5ml/100g）麻醉，在無菌條件下迅速取出脂肪組織。
2. 用含１％青鏈雙抗的D-Hank’s 液沖洗3次。剝離脂肪組織上的血管。
3. 將脂肪組織剪碎，直到組織變為液體狀，加入8-10mL 胰酶，37℃消化90min。
4. 消化完成后，加入等量含血清DMEM 培養基終止消化，過200目篩網去除大塊組織。
5. 以1500r/min 離心5min，去上清液，加入含血清DMEM 培養基重懸細胞。

6. 接種至６ 孔板，放入細胞培養箱（37℃，CO2 濃度5％）。細胞穩定培養24h后換液，沖去未貼壁的細胞，更換DMEM培養基（成分同上）繼續培養。以后每2天換液１ 次，注意觀察培養基有無渾濁、顏色變淡、漂浮物和絮狀物等

細胞形態

大鼠脂肪間充質干細胞培養過程中，約24h即可貼壁生長，細胞呈長梭形生長速度較慢。換液后細胞增殖明顯，出現以長梭形為主的形態，5- 7d 70%-80%可融合達到傳代標準。傳代細胞形態單一，呈長梭形。

牙源間充質干細胞分離

操作步驟

（1）取SD乳大鼠，頸椎脫臼法處死后立即用75%乙醇浸泡，移入超凈工作臺內，用大頭針固定大鼠四肢于工作臺面的泡沫板上。

（2）碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，無菌條件下用滅菌消毒后的鑷子和剪刀解剖出大鼠已萌的牙根發育中的第一磨牙，沿Hertwig上皮起始處橫切分離出包括根尖乳頭、Hertwig上皮、牙囊的根端復合體，PBS溶液沖洗兩遍。

（3）組織塊剪碎，然后采用酶消化法消化培養，單細胞懸液以1X105細胞/ml在加了15%胎牛血清及青鏈霉素的a-MEM培養基中，置37℃、5%CO2恒溫培養箱進行培養。

（4）24小時后棄去培養液（看細胞貼壁情況），PBS沖洗 2-3次去除未貼壁細胞，加入培養液繼續培養。以后每3d半量換液1次，一般10d細胞生長融合。

（5）經0.25%胰酶消化，1：2傳代，其后一般3-5d傳代1次，選取生長良好的第三代細胞進行后續實驗。

細胞形態

牙源間充質細胞原代培養過程中，約24小時即可出現貼壁生長，細胞呈圓形、梭形、三角形生長緩慢。換液后細胞增殖明顯，出現以梭形為主的多種形態，10-14天70%-80%可融合達到傳代標準。傳代細胞形態單一，呈梭形或扁平型，增殖至細胞融合時呈漩渦狀和放射狀排列。

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