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產(chǎn)品介紹

基因敲除敲入技術(shù)一直是研究特定基因功能的有效工具。威斯騰生物利用最新的CRISPR/Cas系統(tǒng)可以有效的實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞系特定基因的敲除和定點(diǎn)突變。

近10年來，mRNA在醫(yī)學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域取得顯著進(jìn)展。研究人員可快速合成任意序列的mRNA片段，并能保存在室溫條件下。在無細(xì)胞的體系中利用DNA轉(zhuǎn)錄生成cap和poly A修飾的mRNA分子穩(wěn)定性良好，而修飾堿基的mRNA在穩(wěn)定性上更獲得大幅提升。在研究基因敲除動(dòng)物及其胚胎發(fā)育中的基因表達(dá)時(shí)，科研人員往往都采用卵母細(xì)胞的mRNA顯微注射的方法，該方法在ZFN、TALEN、CRISPR、重編程細(xì)胞多能性等技術(shù)中得到廣泛應(yīng)用。在這些基因編輯過程中使用mRNA較之DNA有諸多優(yōu)點(diǎn)，例如無需進(jìn)入核內(nèi)并轉(zhuǎn)錄效率更快，RNA易降解也避免基因組遺傳重組現(xiàn)象。

我們利用該技術(shù)，定點(diǎn)敲除和修飾各種細(xì)胞系中的特定基因。對(duì)打靶細(xì)胞進(jìn)行藥物篩選，利用CRISPR/Cas系統(tǒng)獲得的基因敲除細(xì)胞的剔除效率會(huì)明顯高于常規(guī)的利用RNAi和shRNA介導(dǎo)的基因敲落。

技術(shù)特色

1.可實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶基因位點(diǎn)及多個(gè)基因的同時(shí)敲除
2.最新Nickase酶/雙gRNA技術(shù)，顯著降低脫靶率
3.無種屬限制，適用于各種細(xì)胞系的靶向敲除

操作流程

靶向目標(biāo)序列sgRNA的設(shè)計(jì)及載體構(gòu)建

目標(biāo)細(xì)胞系共轉(zhuǎn)染

陽性細(xì)胞株的篩選和鑒定

應(yīng)用范疇

基因功能分析：在細(xì)胞水平研究基因的功能

定點(diǎn)突變：建立點(diǎn)突變細(xì)胞，可用于藥物靶點(diǎn)研究。

啟動(dòng)子功能分析：該方法建立的啟動(dòng)子分析系統(tǒng)，可有效地分析內(nèi)源性啟動(dòng)子的強(qiáng)度，是一種最理想的分析系統(tǒng)。

參考細(xì)胞系

腫瘤細(xì)胞系： BEL-7402人肝癌細(xì)胞 CNE人鼻咽癌細(xì)胞 Hela人宮頸癌細(xì)胞 MCF-7人乳腺癌細(xì)胞等

神經(jīng)細(xì)胞系：SK-N-SH人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

卵巢細(xì)胞系：SK-OV-3人卵巢癌細(xì)胞

血管平滑肌細(xì)胞系：VSMC血管平滑肌

成纖維細(xì)胞系：包皮成纖維細(xì)胞，心肌成纖維細(xì)胞

肺細(xì)胞系：SK-MES-1人肺鱗癌細(xì)胞 NCI-H460人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 A549人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

腎細(xì)胞系：NRK腎小球足細(xì)胞

巨噬細(xì)胞：MH-S小鼠肺泡巨噬細(xì)胞 RAW 264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞 THP-1人單核巨噬細(xì)胞

內(nèi)皮細(xì)胞：HUVEC人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

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具體CRISPR /Cas9細(xì)胞建系技術(shù)定制服務(wù)，歡迎聯(lián)系我們

威斯騰實(shí)驗(yàn)服務(wù)流程

威斯騰生物服務(wù)項(xiàng)目

【本平臺(tái)合作項(xiàng)目】
分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、基因敲出/入、模式動(dòng)物、SPF動(dòng)物保種、病理學(xué)檢測(cè)、免疫學(xué)檢測(cè)、影像學(xué)檢測(cè)、原代培養(yǎng)、細(xì)胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測(cè)序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評(píng)價(jià)、藥理毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識(shí)產(chǎn)權(quán)服務(wù)！
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