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分子生物學檢測
總RNA提取技術服務

時間:2020-07-21 13:41:00 瀏覽:32332次


實驗介紹

TRIZOL試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯仿時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。


RNA提?。?/span>Trizol提?。嶒灢襟E

在收集到生物材料之后,最好能即刻進行RNA 制備工作。若需暫時儲存,則應以液氮將生物材料急速冷凍后,儲存于-80冷凍柜。在制備RNA 時,將存于冷凍柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破細胞,不可以先行解凍,以避免RNase 的作用。

1. 提取組織RNA 時,每50100mg 組織用1ml Trizol 試劑對組織進行裂解;提取細胞RNA 時,先離心沉淀細胞,每5-10 106 個細胞加1ml Trizol 后,反復用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細胞;

2. 將上述組織或細胞的Trizol 裂解液轉入EP 管中,在室溫15~30C下放置5 分鐘;

3. 在上述EP 管中,按照每1ml TRIZOL 0.2ml 氯仿的量加入氯仿,蓋上EP管蓋子,在手中用力震蕩15 秒,在室溫下(1530)放置23 分鐘后, 12000g28)離心15 分鐘;

4. 取上層水相置于新EP 管中,按照每1ml TRIZOL 0.5ml 異丙醇的量加入異丙醇,在室溫下(1530)放置10 分鐘,12000g28)離心10 分鐘;

5. 棄上清, 按照每1ml TRIZOL 1ml 75%乙醇進行洗滌, 渦旋混合, 7500g28)離心5 分鐘,棄上清;

6. 讓沉淀的RNA 在室溫下自然干燥;

7.Rnase-free water 溶解RNA 沉淀。

實驗周期:

大約一周,根據量的多少而有所不同。


威斯騰服務流程


威斯騰生物服務項目

分子生物學檢測 蛋白質與免疫學 動物實驗
實時熒光定量PCR 單克隆抗體制備 帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP) 多克隆抗體制備 抑郁癥動物模型
ELISA(酶聯免疫吸附法)技術 Western-blot 實驗服務 脊髓損傷模型
生化指標檢測 蛋白雙向電泳實驗服務 腦外損傷模型
雙熒光素酶報告基因檢測 原核蛋白表達純化 骨神經損傷模型
染色質免疫共沉淀(ChIP) 真核蛋白表達純化 心肌缺血模型
GST pull Down ITRAQ定量蛋白質組學 心力衰竭模型
SLAC蛋白組學 肺動脈高血壓動物模型
高血壓模型
病毒包裝純化 實驗課題整體外包 粥樣動脈硬化模型
過表達/干擾慢病毒包裝純化 整體課題外包 大腦中動脈阻塞模型
過表達/干擾腺病毒包裝純化 細胞整體實驗外包 慢性之氣管炎模型
逆轉錄病毒包裝純化 動物整體實驗外包 過敏性哮喘模型
腺相關病毒包裝純化 肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片 原代細胞培養 肝纖維化模型
細胞因子芯片 骨髓間充質干細胞培養 膽結石模型
生長因子芯片 脂肪干細胞培養 急性胰腺炎模型
信號通路磷酸化水平檢測芯片 心肌成纖維細胞培養 急性腎衰竭模型
BioPlex懸浮芯片 軟骨細胞培養 體內血栓模型
生長因子芯片 血管內皮細胞培養 關節炎模型
炎癥因子芯片 神經元細胞培養 I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片 內皮組細胞原代培養 裸鼠成瘤
凋亡因子芯片 基因編輯動物
趨化因子芯片 電生理相關服務 動物整體實驗服務
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片 膜片鉗實驗
細胞生物學 高通量測序 代謝組學
細胞原代培養 mRNA測序 氣相色譜GC/MS
MTT檢測 LncRNA測序 液相色譜LC/MS
細胞凋亡檢測 全基因組測序 核磁共震NMR
細胞周期檢測 RNA-Seq測序
細胞克隆形成實驗 外顯子測序 影像學相關實驗
Transwell細胞遷移/侵襲 16s擴增子測序 Micro-CT
流式分選 Small RNA測序 小動物活體成像
CCK8/XTT檢測 宏基因組測序 核磁共振
臺盼藍檢測細胞活性 單細胞測序 PET-CT
藥物篩選細胞學實驗 circleRNA測序
細胞粘附性檢測 甲基化測序 基因編輯動物
細胞劃痕實驗 條件性敲除小鼠/大鼠
細胞生物學整體實驗 全基因敲除小鼠/大鼠
細胞成管實驗
病理學檢測 CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入 基因芯片
掃描電鏡 基因定點突變細胞系 LncRNA芯片
透射電鏡 單基因敲除細胞系 miRNA芯片
HE染色 多基因敲除細胞系 mRNA芯片
免疫組化 目的基因敲入細胞系 甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
Tunel(原位末端凋亡法)檢測 報告基因敲入細胞系 SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
激光共聚焦 miRNA/LncRNA敲除細胞系
免疫熒光
Masson染色 CRISPR/Cas9動物敲除/敲入
原位雜交 基因敲除大鼠/小鼠
熒光原位雜交 基因敲入大鼠/小鼠
特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)
行為學檢測 藥物篩選服務項目 藥效學評價
水迷宮實驗 高通量自動藥物篩選平臺 神經系統藥物藥效學評價
曠場實驗 細胞高內涵藥物篩選平臺 抗腫瘤藥物藥效學評價
重復性刻板行為檢測 蛋白質組學靶標研發平臺 心血管系統藥物藥效學評價
動物跑臺檢測 分子藥理研究平臺 泌尿系統藥物藥效學評價
強迫游泳 生物膜片鉗藥物篩選平臺 內分泌系統藥物藥效學評價
常規藥物體外篩選 抗炎免疫藥物藥效學評價


【本平臺合作項目】
分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務!
【全國免費熱線】400-675-6758
【電話】 023-65316016,023-65316556
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【地址】 重慶市高新區二郎創業大道高科創業園D棟2樓

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