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透射電子顯微鏡在材料科學、生物學上應用較多。由于電子易散射或被物體吸收，故穿透力低，樣品的密度、厚度等都會影響到最后的成像質量，必須制備更薄的超薄切片，通常為50～100nm。所以用透射電子顯微鏡觀察時的樣品需要處理得很薄。

常用的方法：超薄切片法、冷凍超薄切片法、冷凍蝕刻法、冷凍斷裂法等。對于液體樣品，通常是掛預處理過的銅網上進行觀察。

三、實驗材料

PHILIPS TECNAI-10透射電子顯微鏡，2.5%戊二醛，細胞培養液（含10%血清），胰酶（使用時濃度為0.1%，含0.02%EDTA，制備時即取100mg胰酶和20mgEDTA溶于100mLPBS溶液，并在無菌操作臺上用一次性過濾器過濾）、PBS、6孔板、離心管等細胞培養常用物品。

四、透射電鏡樣本制備實驗步驟

A．細胞處理步驟

用6孔板或培養瓶培養細胞，待細胞生長達到60%-70%，吸出舊培養基，根據實驗需要加藥或外界刺激處理，最后用胰酶消化并收集細胞，1000r/min離心5min，棄上清，加PBS混勻，并轉移1.5mlEP管中，1000r/min離心10min，輕輕吸去PBS，加1ml2.5%戊二醛，此時不要混勻吹打，使細胞成團聚集，上下倒置細胞不散開為最好，4℃保存。

樣品送檢，包埋，上機觀察拍照。

胰酶消化步驟：先吸除培養瓶中舊培養基，用PBS洗2次，加入胰酶消化液約0.5ml，晃動使消化液鋪均勻，置37度培養箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入1-2ml完全培養基后，輕輕吹打，收集細胞至離心管，1000轉/min離心5min，棄上清，即得到細胞沉淀。

B．微生物處理步驟

收集微生物沉淀，加PBS混勻，并轉移1.5mlEP管中，1000r/min離心20min（時間較細胞處理的時間長），輕輕吸去PBS，加1ml2.5%戊二醛，此時不要混勻吹打，使成團聚集，上下倒置細胞不散開為最好，4℃保存。

樣品送檢，包埋，上機觀察拍照。

C．組織塊處理步驟

取材。將組織切成1mm左右的方塊貯存于1.5mlEP管中。加1ml2.5%戊二醛， 4℃保存。

樣品送檢，包埋，上機觀察拍照。

結果展示：

威斯騰實驗服務流程：

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